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钙盐染色液(Von Kossa银法)又称冯库萨染色液，属金属置换法，其原理在于Von Kossa银溶液作用于含有不溶性钙盐的切片时，钙被银置换，银盐在光的作用下被还原为黑色金属银，适用于大量样本的钙盐组织染色。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

钙在人体内大量存在，构成骨骼作为支持人体的支架，在分泌、运送、肌肉收缩、神经传导等也起重要作用，钙在机体内以两种形式存在，一种是离子钙，存在血液循环内，即所谓血钙；另一种是结合钙，和蛋白、碳酸或磷酸结合而沉着在组织内，除骨骼和牙齿外正常时钙渗透在所有组织和细胞中，一般不以固体状态出现在组织内，但在某些情况下钙析出成固体并沉着于组织内，则为病理性钙盐沉着，沉着的钙盐主要是磷酸钙，其次为碳酸钙。钙盐通常是单折射的，但草酸钙是双折射的，当使用HE染色时钙一般呈紫蓝色，许多染料可以于钙形成螯合物，包括茜素红S、红紫素、核固红等，茜素红S属一种蒽醌类衍生物，是茜素磺酸钠盐，它能与碳酸钙或磷酸钙中的钙盐螯合形成橙红色复合物。钙盐染色常用方法有硝酸银法和茜素红S法。

• 10%中性福尔马林固定液、系列乙醇、蒸馏水、环保脱蜡透明液、中性树胶
  
• HE染色液或Van Gieson染色液

• 钙盐组织固定以中性福尔马林为佳，不宜采用Bouin液等酸性固定液和甲醛钙固定液；如用常规的10%福尔马林固定，固定4～6h后即可进行脱水包埋，以防止固定液酸化导致钙盐溶解。
  
• 作用时间取决于阳光照射时光的强度和时间；如暴露于强光下15min已经足够；如暴露于紫外灯下10min即可；如暴露于一般光线下，宜适当延长曝光时间。
  
• 如果钙盐染色过深，可用蒸馏水适当稀释Von Kossa银溶液或减少光照时间或光照强度；如果钙盐染色较浅，应增加Von Kossa银溶液用量并增加光照时间和光照强度。
  
• 该染色法可以区分尿酸盐和钙盐，其原理在于钙盐不溶解于碳酸锂溶液，尿酸盐易溶解于碳酸锂溶液，切片经碳酸锂处理后入Von Kossa银溶液并置于强光下尿酸盐呈阴性反应。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 常规染色
  
  • 组织固定于10%中性福尔马林固定液，常规脱水包埋。
    
  • 切片厚度3～5μm，常规二甲苯或脱蜡透明液脱蜡至水，蒸馏水洗。
    
  • 切片入Von Kossa银溶液，强光照射15～60min，蒸馏水洗1min。
    
  • 入海波溶液处理2min，HE染色液或Van Gieson复染细胞核1min。
    
  • 常规脱水，二甲苯或脱蜡透明液透明，中性树胶封固。
• 不溶性钙染色
  
  • 组织固定于10%中性福尔马林固定液，常规脱水，注意在95%乙醇中脱水应充分。
    
  • 塑料包埋，室温过夜，37℃烤箱中聚合2～4天，-20℃冰箱冷却15～20min。
    
  • 切片厚度3～5μm，未脱钙骨切片脱塑至水，蒸馏水洗。
    
  • 切片入Von Kossa银溶液，强光照射10～60min，蒸馏水洗。
    
  • 入海波溶液处理2min，HE染色液、中性红或Van Gieson复染细胞核1min。
    
  • 常规脱水，二甲苯或脱蜡透明液透明，中性树胶封固。